BELLAMY-AGBE Marion
Ingénieur en Biologie, Recherche, CEA de Fontenay-aux-roses
Techniques maitrisées :
Biologie cellulaire :
Isolement et mise en culture de kératinocytes à partir d’explants de peau, culture de lymphocytes, culture de plusieurs lignées (HaCaT, HEK, CHO, RBL, HepG2, Caco-2, EJ-30, B3), étude de la mitogenèse par incorporation de thymidine tritiée, système mimant la barrière intestinale (Caco-2), test de cytotoxicité, immunomarquages.
Biologie moléculaire :
Transformation de bactéries, extraction et purification de plasmides, transfection de cellules, isolement et amplification de clones, extraction et dosage d’ARN, RT-PCR en temps réel, production d’enzymes recombinantes, TRAPeze ELISA, inactivation de l’expression de gènes par transfection de plasmides exprimant des shRNA, mutagenèse dirigée.
Biochimie :
Test d’induction et d’inhibition des Cytochromes P450 et UDP-Glucoronosyltansferases sur hépatocytes humains, test d’adsorption de molécules aux protéines plasmatiques par dialyse à l’équilibre, purification d’anticorps (précipitation au sulfate d’ammonium, déssalage, chromatographie d’affinité), western blot, Granulométrie laser, Zétamétrie, Chromatographie en Phase Gazeuse, extraction lipidique.
Cytogénétique :
Obtention de métaphases et étalements sur lames, obtention de métaphases in situ, FISH (Hybridation des séquences télomériques, subtélomériques et centromériques, Multi-FISH), marquage de sondes plasmidiques par la digoxygénine, hybridation de sondes plasmidiques, immunofluorescence, immunofluorescence couplée au FISH.
Projets de recherche :
- Etude de l’instabilité chromosomique générée par la perte d’un télomère dans les cellules humaines (modèle cellulaire présentant un télomère taggé)
- Etude du rôle des protéines télomériques par inactivation de l’expression de gènes codant ces protéines
- Virus et instabilité chromosomique.
- Participation au projet Européen EpiRadBio (depuis avril 2011) – Etude de la susceptibilité individuelle dans la survenue de tumeurs radio-induites après expositions à des faibles doses de radiations ionisantes (cas de la cohorte d’hémangiomes française)– Demande des autorisations aux autorités françaises compétentes pour la création d'une banque biologique et analyses biologiques – Stratégies à adopter pour l’étude biologique de ces échantillons de sang - Analyse du polymorphisme télomérique.
2005 - 2007Activité de la société : Recherche de nouveaux médicaments (3 départements : Chimie, Biologie / Biochimie, Pharmacologie)
Poste occupé : Technicienne de recherche d'Octobre 2005 à Avril 2007 dans le département de Biologie et de Biochimie, équipe de pharmacocinétique et métabolisme
Activité : Mise en place de tests spécifiques visant à établir le potentiel thérapeutique de molécules innovantes. Mise en place de tests visant à évaluer les paramètres pharmacocinétiques et le métabolisme de molécules d’intérêt. Sous la direction de Philippe ROBERT (Tel : 02.99.28.04.58, Mail : p.robert@bioprojet.com ).
Techniques mises en oeuvre :
Culture de plusieurs lignées (HEK, CHO, RBL, HepG2, Caco-2), étude de la mitogenèse par incorporation de thymidine tritiée, mesure de résistivité électrique entre les faces apicales et basolatérales d'inserts ensemencés par des Caco-2 (système mimant la barrière intestinale), test de cytotoxicité, transformation de bactéries, extraction et purification de plasmides, transfection de cellules, isolement et amplification de clones, production d’enzymes recombinantes, test d’induction et d’inhibition des Cytochromes P450 et UDP-Glucoronosyltansferases sur hépatocytes humains, test d’adsorption de molécules aux protéines plasmatiques par dialyse à l’équilibre, purification d’anticorps (précipitation au sulfate d’ammonium, déssalage, chromatographie d’affinité), western blot.
Principaux résultats (Projets confidentiels) :
Mise au point d'un test de criblage d'une nouvelle cible pharmacologique (2 isoformes d'une enzyme impliquée dans le métabolisme lipidique). Test actuellement en cours d'automatisation.
Mise au point d'un système mimant la barrière intestinale (Caco-2) visant à évaluer l'absorption intestinale de molécules d'intérêt et les mécanismes de transport impliqués.
Mise au point d'un test d'adsorption de molécules aux protéines plasmatiques ou sériques de différentes espèces par dialyse à l'équilibre.
Mise au point d'un test d'induction des UDP-Glucuronosyltranferases sur hépatocytes humains.
Recherche d'agonistes ou d'antagonistes d'un récepteur donné par étude de la mitogenèse.
2005 - 2005Activité de la société : Une recherche de pointe pour une cosmétologie innovante, autour de plusieurs axes thérapeutiques : Photo-vieillissement, Photo-protection, Sécheresse cutanée, Santé du cheveux, Amincissement.
Poste occupé : Ingénieur d'étude stagiaire de Mars à Août 2005 au sein du CERPER (Centre Européen de Recherches sur les Epithélium de Revêtement) dans le laboratoire de Biologie cellulaire
Sujet : Différenciation kératinocytaire : étude d’une cible d’intérêt (Récepteurs PPARs) – criblage secondaire (contexte : défaut de différenciation kératinocytaire impliqué dans de nombreuses maladies de peau). Sous la direction de Françoise BELAUBRE (Tel : 05.62.48.85.32, Mail : francoise.belaubre@pierre-fabre.fr ).
Techniques mises en oeuvre :
Isolement et mise en culture de kératinocytes à partir d’explants de peau, culture de HaCaT, extraction et dosage d’ARN, RT-PCR en temps réel, transformation de bactéries, purification de plasmides, transfection de cellules, immunomarquage, western blot, criblage de principes actifs.
Principaux résultats :
Comparaison de l'effet d'agonistes PPARs (de spécificité connue vis à vis des différentes isoformes : alpha, beta/delta et gamma) sur la différenciation kératinocytaire chez 2 modèles cellulaires différents : la lignée kératinocytaire HaCaT et les Kératinocytes Normaux Humains (NHK). Les 2 modèles cellulaires ne réagissent pas vraiment de la même manière aux agonistes PPARs, la lignée HaCaT ne constitue donc pas un modèle de criblage pour la recherche de principes actifs induisant la différenciation kératinocytaire.
Mise en évidence d'une molécule d'intérêt (activité vis à vis de l'isoforme PPAR-delta mise en évidence lors d'un criblage primaire) qui, parmi toutes les molécules testées, montrent l'effet le plus important sur l'induction de la différenciation kératinocytaire chez les NHK. Détermination de sa spécificité vis à vis des autres isoformes.
Les agonistes PPAR-delta sélectifs ou mixtes semblent être les agonistes les plus efficaces pour l’induction de la différenciation.
2004 - 2004Activité de l'Institut National de la Recherche Agronomique : Premier institut de recherche agronomique en Europe, deuxième dans le monde, l'Inra mène des recherches finalisées pour une alimentation adaptée, pour un environnement préservé et pour une agriculture compétitive et durable
Poste ocupé : Chargée d'études stagiaire de Mars à Juillet 2004 au sein de l’UMR Sciences et Technologie du Lait et de l’Oeuf dans le département de Biochimie et de Physico-chimie (Sujet : Etude des mécanismes de la dégradation enzymatique des globules gras du lait de vache)
Techniques mises en oeuvre :
Granulométrie laser, Zétamétrie, Chromatographie en Phase Gazeuse, extraction lipidique.
Principaux résultats :
Détermination des conditions expérimentales permettant d’étudier les mécanismes de dégradation enzymatique des globules gras du lait en suspension dans une phase aqueuse par une préparation de lipase (contenant des traces de protéases et de phospholipases).
Des altérations de la membrane des globules gras par des protéases et/ou phospholipases permettent l'accés aux triglycérides composant le coeur des globules gras à la lipase entrainant ainsi une coalescence des globules gras ainsi qu'une agrégation de ceux-ci. Apparition d'une nouvelle population de particules de taille inférieure à la population initiale de globules gras correpondant probablement à des structures supra-moléculaires constituées des produits de lipolyse des globules gras du lait. La lipase utilisée ne présente pas de spécificité de substrat.
2003 - 2003Activité de la société : Le Crédit Agricole figure aux premiers rangs des banques mondiales par l’importance de ses fonds propres.
Poste occupé : Agent d'accueil d'avril 2003 à août 2003 (Accueil des clients, réalisation des opérations courantes, caisse des commerçants, chargement des ditributeurs)
Activité de la société : Fabrication de charcuterie fine, jambon cuit, salades traiteur, patisseries salées, entrées traiteur, plats cuisinés, salaison sèche, desserts.
Poste occupé : Agent de production au cours des mois de juillet et août 2001 et 2002 (travail en équipe sur différentes chaines, responsable d'un appareil de tranchage)