David DOREAU
Ingénieur d'études, UMR1089 - Laboratoire de Thérapie Génique
85400LuçonPays de la Loire - France
Ingénieur de formation, j'ai abordé pendant mon cursus des compétences techniques comme la gestion de projet, la maîtrise de la qualité ainsi que l'introduction aux outils de développement informatique, ainsi que des compétences scientifiques comme la biochimie, la biologie cellulaire et moléculaire, le génie métabolique et génétique qui me spécialisent en biotechnologies.
J'ai d'abord été en poste en tant qu'assistant ingénieur à l'UR 4 dans l'équipe dirigée par le professeur Isabelle LIMON, dont la thématique de recherche est ciblée sur les pathologies du système vasculaire.
J’y ai développé mes compétences dans les techniques de laboratoire conventionnelles (ELISA, SDS-PAGE/WB, Zymographie, ICC, IHC, PCR, qPCR, clonage) et de culture cellulaire (Anesthésie d'animaux d'élevage, prélèvements d'aortes, cultures primaires, transfection).
J’ai par la suite été en poste à l’Institut du Thorax, au sein de l’UMR 915 en tant qu’ingénieur de recherche dans l’équipe dirigée par le Dr Bruno PITARD. Le but du projet auquel j’ai participé est d’étudier l’impact de la forme mutée et donc non-fonctionnelle du canal CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator) dans des cas de mucoviscidose sur la capacité des CPA :
- à internaliser/dégrader les agents pathogènes responsables de la dégradation de la fonction respiratoire dans un contexte de mucoviscidose.
- à présenter les antigènes qui en découlent pour induire la réaction immunitaire chez le patient.
L’objet de mon travail, en collaboration avec la société InCellArt, a été de mettre au point la vectorisation d’ARN interférents (siRNA) ciblant spécifiquement ce canal à l’aide de molécules synthétiques non virales, dans un modèle in vitro de cellules épithéliales bronchiques immortalisées d’une part, et dans des prélèvements de CPA de donneurs sains d’autre part.
Aujourd'hui en poste au sein du Laboratoire de Thérapie Génique de l'Université de Nantes (INSERM UMR 1089 : Translational Gene Therapy for Retinal & Neuromuscular Diseases). J'ai acquis une expertise en biologie moléculaire, mon domaine de prédilection, qui je l'espère me permettra de me rediriger vers mon objectif professionnel, à savoir l'innovation et le développement, dans une PME jeune et dynamique pour lui apporter mon savoir-faire et mon dynamisme.
43 contactsDepuis 2011
L'UMR 649 est une plate-forme de production de vecteurs viraux (Adenovirus, Lentivirus et Adeno-Associated-Virus (AAV)), outils de plus en plus utilisés par les équipes de recherche pour le transfert de gènes thérapeutiques in vitro et in vivo. Elle s'organise en 3 groupes :
- Deux équipes de recherche qui utilisent ces vecteurs afin d'étudier in vivo leurs interactions avec l'organisme en terme d'efficacité de transfert de gène, d'immunogénicité et de biodistribution.
- Une équipe de R&D qui a pour mission de développer les procédés de production et de purification de ces vecteurs dans le cadre des GMP et de mettre en place un contrôle qualité strict afin de produire des lots de grade clinique.
- Une équipe de production qui met en oeuvre des lignées cellulaires modifiées génétiquement pour produire la structure des vecteurs viraux, le genome thérapeutique étant apporté par transfection de plasmides vecteurs.
Pour plus d'informations :
http://www.vectors.univ-nantes.fr/
Mon travail a essentiellement consisté en la construction de plasmides :
- construction à façon de plasmides vecteurs à partir de transgène fournis par les clients désirant acquérir un lot de vecteur viral à partir de leurs plasmides.
- construction d'outils plasmidiques pour l'équipe de R&D dans le cadre de la mise en place de lignées cellulaires productrices stables, où l'apport du transgène pour la production de vecteur thérapeutique ne se fait plus par transfection d'un plasmide vecteur, mais par intégration site spécifique dans le génome des cellules.
J'ai également eu la responsabilité de la banque de plasmides de l'unité.
Enseignement - Animation - Recherche
Expérience professionnelle
2010 - 2011Missions
* Mise au point d’un protocole de vectorisation de siRNA dans des cellules dendritiques humaines à l'aide de nanovecteurs lipidiques
* Collaboration avec la société InCellArt pour l’étude de l’efficacité de transfection de vecteurs synthétiques innovants
Détails de l'expérience
* Etude de différentes formulations de molécules lipidiques sur leur efficacité à vectoriser des acides nucléiques (ADN, ARNm, siRNA) dans des cellules eukaryotes de phénotypes variés (cellules adhérentes/en suspension, lignées/cultures primaires ...)
* Etude par cytométrie de flux des effets de l'interferon gamma sur le phénotype moléculaire de cellules épithéliales bronchiques selon qu'elles expriment ou non le canal CFTR.
* Étude de l’impact de l’absence du canal CFTR sur la capacité des cellules dendritiques à prendre en charge les microorganismes pathogènes liés à la mucoviscidose et à présenter les antigènes pour induire la réaction immunitaire.
* Modèles in vitro utilisé pour les essais de vectorisation de siRNA : lignées cellulaires épithéliales bronchiques établies à partir de cellules pulmonaires issues d'un patient sein (lignées 16HBE14o-, CFTR +/+) ou d'un patient atteint de mucoviscidose (lignée CFBE41o-, CFTR -/-).
Description de l'entreprise
In-Cell-Art SAS est une entreprise biopharmaceutique basée à Nantes spécialisée dans le développement préclinique et pharmaceutique de nano-vecteurs pour les médicaments macromoléculaires, et notamment les vaccins de 3e génération (vaccins ADN).
Site web
http://www.umr1087.univ-nantes.fr/79349628/0/fi...
http://www.incellart.com/
Enseignement - Animation - Recherche
2008 - 2009Missions du poste
¤ Organisation et mise en œuvre des techniques de routine du laboratoire :
- biologie moléculaire : Extraction d'ARN totaux, PCR, PCR en temps réel, Rétro-Transcription, Génotypage, Transformation
- biochimie : ELISA, EIA, Dosage de protéines (par spectrométrie et spectrofluorométrie), Electrophorèse, Zymographie
- culture cellulaire : Anesthésie d'animaux d'élevage, Prélèvements d'aortes, Ensemencement, Trypsination, Transfection, Electroporation
- immunologie : Western Blot, immunohistochimie, immunocytochimie
¤ Clonage de plasmide
¤ Formation de stagiaires aux techniques utilisées
¤ Gestion informatique des commandes de l'équipe
Enseignement - Animation - Recherche
2007 - 2007Vandœuvre lès Nancy (Meurthe-et-Moselle)
Stage professionnel de longue durée
Sujet : Projet de développement d’un procédé de purification d’un peptide recombinant par ultrafiltration membranaire.
- Recherche Bibliographique sur le peptide et l’ultrafiltration
- Optimisation de la méthode d’analyse quantitative (RP-HPLC (Logiciel EMPower) – GC)
- Mise en place et développement de l'installation
- Caractérisation des membranes et optimisation des paramètres du procédé
- Acquisition de données expérimentales en vue du dimensionnement d’un système au niveau pilote
- Relations avec les fournisseurs d’instruments et consommables
- Suivi du projet avec le chef de projet
Biotechnologie
2005 - 2006Mesnil Saint Nicaise (Somme)
Laboratoire de développement de procédés.
Stage professionnel de longue durée
Sujet : Industrialisation d’une nouvelle souche bactérienne productrice d’acide glutamique
- Participation à l’adaptation du procédé mis au point par les équipes japonaises aux installations de l’entreprise (fermenteurs jusqu’à 500m3).
- Optimisation du procédé en laboratoire / pilote (fermenteurs de 3L, 30L et 10m3).
- Suivi des essais / Actions correctives
- Participation au démarrage du nouveau procédé.
- Surveillance microbiologique / Stérilité / Contamination
- Suivi de la production après le lancement de la nouvelle souche.
Biotechnologie
Ancien élève de
Hobbies
Sports (Volley-ball , Judo , Jogging) , Sports mécaniques (Motocyclisme , Karting) , Musique contemporaine , Astronomie
