Pierre Fabre Dermo cosmetique
- Formatrice pharmaceutique
Castres2010 - maintenant
INSERM U563
- Ingénieur d'études
2004 - 2010Je travaille au sein du département de génétique fonctionnelle des maladies des épithéliums dirigé par le Pr Alain Hovnanian. Je participe au développement de nouvelles approches thérapeutiques pour les épidermolyses bulleuses dystrophiques (EBD). Cette maladie est due à des mutations du gène COL7A1 codant le collagène VII, le constituant des fibres d’ancrages qui assure l’adhésion de l’épiderme au derme. Différentes approches sont ainsi développées: une thérapie génique ex vivo des formes récessives d’EBDs (EBDR) par complémentation des cellules à l’aide d’un rétrovirus sécurisé transportant l’ADNc du gène COL7A1, et une approche innovante de thérapie génique par saut d’exon, permettant de traiter in vivo les formes récessives et dominantes des EBDs. Au sein de l'équipe, je participe à la culture cellulaires des cellules souches du derme (fibroblastes) et de l'épiderme (kératinocytes) et à la fabrication de peaux équivalentes humaines à l'aide de gel de fibrine. Je greffe ces peaux équivalentes humaines sur des souris immunodéficientes, j’assure le suivie des animaux greffés ainsi que l’analyse des greffons par immunohistochimie et microscopie électronique à transmission. Je réalise la préparation des prélèvements (dissection des animaux, inclusion en paraffine et en congélation, coupes au cryostat et au microtome) ainsi que les analyses (coloration de routine, immunohistochimie, immunocytofluorescence et microscopie électronique). L’équipe a pu ainsi démontrer la correction fonctionnelle des cellules de patients EBDR transduites avec le rétrovirus sécurisé transportant l’ADNc du gène COL7A1
Je participe également à l'étude et à la caractérisation de formes rares d'épidermolyses bulleuses chez des patients, à l’aide de techniques d’immunohistochimie sur des coupes de peau et de double marquages en fluorescence (microscopie confocale) sur des keratinocytes primaires en culture, J’effectue aussi les études biochimiques par Western Blot et RT-PCR quantitative. Pour mener à bien ces études, J’ai développé un panel de marquage en immnohistochimie des différentes protéines constituants les hemidesmosomes ainsi que des marqueurs spécifiques des différentes couches de l’épiderme. J'ai par ailleurs suivi une formation de microscopie confocale afin de mieux exploiter mes résultats expérimentaux. Ces travaux font l’objet de deux manuscrits en préparation et je participe activement à leurs écritures.
Par ailleurs, au sein du laboratoire, je gère les stocks des réactifs nécessaires aux différentes techniques d'histologie, ainsi que les compléments indispensable à la culture des cellules primaires de l'épiderme. Actuellement, j'encadre une étudiante en master première année et un e assistante-ingénieur nouvellement recrutée au sein de notre équipe.
INSERM U563
- Assistant-ingénieur
2003 - 2003J'ai travaillé 3 mois à l’hôpital Purpan dans l’unité INSERM U563, Département Ophtalmologie et Pathologies des Epithéliums dirigé par le Pr François Malecaze. Au sein de cette équipe, j’ai participé à un projet de recherche sur la prévention de la cataracte secondaire par thérapie génique. La première partie du projet consistait à étudier l’efficacité de différents gènes pro-apoptotiques à induire l’apoptose de ces cellules épithéliales résiduelles responsable de l'apparition de la cataracte secondaire. La deuxième partie du projet portait sur le ciblage de ces cellules épithéliales résiduelles en utilisant des d’adénovirus exprimant le gène rapporteur de la beta-galactosidase sous le contrôle de différents promoteurs tissus-spécifiques. Pour ce projet, j’ai manipulé ces adénovirus recombinants en laboratoire confiné de type L3 et réalisé les infections sur des cellules en culture ainsi que sur des cornées et des rhexis de lapin. J’ai développé des tests d’apoptose (TUNEL, annexine V) et J’ai également appris les techniques de cytomètrie de flux. L’ensemble de ce travail a fait l’objet de deux publications en 2006. J’ai effectué ce travail au sein d’une équipe constituée d’une adjointe technique et de trois étudiants dont un en DEA que j’ai encadré en particulier pour la manipulation des adénovirus en laboratoire L3, la mise en place des différents tests d’apoptose et l’analyse des résultats.
Institut Claudius Régaud
- Technicienne de laboratoire
2002 - 2003J’ai étudié le pouvoir radiosensibilisant d'inhibiteur de farnésyl transférases sur différentes lignées cancéreuses humaines. Ce poste m’a permis d’acquérir de solides compétences en biologie cellulaire (culture de lignées, transfections stables et transitoires, test de clonogénie, test de prolifération, Western Blot) ainsi que le travail en laboratoire L2. Ces deux expériences à l’institut Claudius Régaud ont également démontré ma capacité d’autonomie et d’adaptation, ma rigueur scientifique et mon sens du travail en équipe. En effet durant mon DESU puis mon CDD, j’ai travaillé en collaboration avec trois techniciennes et cinq étudiants
Institut Claudius Régaud
- Stagiaire
2000 - 2001J'ai réalisée ma premières expériences professionnelles lors de mon un stage de DESU. J'ai effectué ce stage dans le laboratoire d’Oncologie Moléculaire de l’institut Claudius Régaud. J’ai été chargée de mettre en place une technique d’identification des grandes délétions du gène de prédisposition au cancer du sein et de l'ovaire BRCA1. A partir de la littérature scientifique, j’ai développé l’amplification par PCR de fragments de grande taille, permettant d’identifier les délétions ou insertions de plusieurs kilobases que subit le gène BRCA1. Ce travail effectué en autonomie m’a permis de maîtriser plusieurs techniques de biologie moléculaire (extraction d’acide nucléiques, PCR, RT-PCR, séquençage, clonage).
